HILIC和SEC色谱柱哪个更适合糖蛋白分析？

在糖蛋白分析中，HILIC（亲水作用色谱）和SEC（体积排阻色谱）各有优势，具体选择需根据分析目标和技术需求决定：

1. ‌HILIC色谱柱的适用性‌

‌分离机理‌：HILIC通过亲水分配、氢键和静电作用保留极性化合物，尤其适合糖基化位点或聚糖结构的分析‌

2。其高有机相流动相（如乙腈）兼容质谱检测，能增强离子化效率‌

‌应用场景‌：常用于N-糖和O-糖的分离，例如通过Biozen Glycan等专用柱实现高分辨率的糖型分析‌

3。HILIC还能直接分析生物样品（如蛋白沉淀上清液），避免繁琐的样品前处理‌

‌优势‌：对强极性糖类保留能力强，峰形对称，适合液质联用‌

2. ‌SEC色谱柱的适用性‌

‌分离机理‌：SEC基于分子大小差异分离，适用于完整糖蛋白或聚集体分析，如测定药物/抗体比率（DAR）或聚集体含量‌

‌应用场景‌：多用于评估糖蛋白的完整性或翻译后修饰（如氧化），例如沃特世的ACQUITY Premier SEC柱可快速分离蛋白片段‌

‌优势‌：兼容高流速，适合高通量生产质控，但对糖基化细节的分辨率较低‌

3. ‌综合建议‌

‌糖基化结构分析‌：优先选择HILIC，因其对聚糖异构体的分离能力更强‌

‌完整性或聚集体检测‌：SEC更高效，尤其适用于生物制药的CQA评估‌

‌联用技术‌：HILIC常与质谱联用，而SEC更适合与紫外检测器搭配‌

若需同时分析糖基化和蛋白完整性，可考虑二维液相色谱（如HILIC-SEC联用）。