为什么需要活化色谱柱？

活化的主要目的是去除色谱柱内的杂质，包括残留溶剂、水分和其他低沸点物质，从而保证固定相充分润湿，碳链舒展彻底，使色谱柱达到最佳的工作状态。此外，活化还能帮助恢复柱效，提升色谱柱的惰性，减少对样品组分的非特异性吸附或化学反应的可能性5。

2. 不同类型的色谱柱如何活化？

反相色谱柱

新的C18柱通常先用甲醇或乙腈冲洗20-30个柱体积。

接着使用甲醇/乙腈:水(50:50)冲洗10个柱体积。

最后用流动相平衡10-30柱体积6。

正相色谱柱

新柱直接用流动相平衡20-30个柱体积即可6。

离子交换色谱柱（如SAX, SCX）

新柱先用100%甲醇或乙腈冲洗20个柱体积。

然后转换到流动相进行平衡6。

ShimNex HESAX/SCX以及WPSAX/SCX色谱柱

需要至少20倍柱体积的流动相来平衡色谱柱。

当流动相中含有较高浓度的缓冲盐时，为防止盐析出，可先使用20%乙腈水溶液冲洗超过5倍柱体积作为缓冲，再过渡到流动相。

因为SCX色谱柱键合的是磺酸基团，容易与醇类发生酯化反应，因此应避免在流动相中使用醇1。

3. 活化过程中需要注意哪些事项？

在活化过程中，流速应该从较低开始逐渐增加至正常工作流速。 实验室离心机 

对于长期未使用的色谱柱或是经过多次使用后性能下降的色谱柱，活化是一个恢复其初始分离效能的有效手段。

如果流动相中含有缓冲盐，则需注意先用水过渡，即每天分析前先用纯水冲洗30分钟以上，再用含缓冲盐的流动相平衡；分析结束时也需先用水冲洗去除缓冲盐，最后再用甲醇冲洗保护柱子6。

4. 什么时候需要反冲色谱柱？

当流动相中长时间使用了缓冲盐或者等度高比例水相导致柱头严重污染时，可能需要采取反冲措施。具体方法会根据不同的情况而有所不同，但一般涉及改变流动相组成以增强清洗效果2。

通过遵循上述指导原则，可以有效地完成色谱柱的活化过程，并维持其良好的工作状态。如果遇到特殊情况或特定型号的色谱柱，建议参照制造商提供的具体指南来进行操作。