如何选择高效液相色谱仪的梯度洗脱与等度洗脱

液相色谱仪的梯度洗脱和气相色谱仪中的程序升温类似，给色谱分离带来很大的方便，已成为高效液相色谱仪不可缺少的部分。

所谓梯度洗脱，就是有两种或两种以上不同极性的溶剂，在分离过程中按照一定程序连续地改变，以改变流动相的配比和极性。通常用的流动相为二元溶剂。在梯度运行期间，强溶剂B（如反相HPLC中的甲醇）的浓度增大。一般以这种溶剂中强溶剂B的体积比（%B）表示。

一、现在有许多实验室在使用液相色谱仪的梯度洗脱技术，这是因为梯度洗脱可克服等度洗脱中的一些弱点问题：

1、减少手工比例配比流动相，从而避免由此引起的误差；

2、 避免早流出峰分离度不好的缺点；

3、避免晚流出峰峰变快峰高降低的缺点；

4、 避免混合物容量因子范围宽时分析时间长的缺点；

5、 避免保留时间长的组分污染色谱柱的缺点。

二、梯度洗脱液相色谱仪适合于以下几种分析情况：

1、 具有较宽容量因子范围的样品，即组分较为复杂的；

2 、大分子样品，相对分子质量大于1000的，尤其是生物样品。

3 、一些含有高保留时间的组分会干扰样品分析，如果在一次分析中不能把它洗脱出去，就会残留污染色谱柱，并影响下一次的样品分析。

4、 即使在使用等度时也可以使用梯度洗脱选择流动相的比例。

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